分光光度计

分光光度计

分光光度计，又称光谱仪(spectrometer)，是将成分复杂的光，分解为光谱线的科学仪器。测量范围一般包括波长范围为380——780 nm的可见光区和波长范围为200——380 nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。钨灯的发射光谱：钨灯光源所发出的380——780nm波长的光谱光通过三棱镜折射后，可得到由红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫组成的连续色谱；该色谱可作为可见光分光光度计的光源。

原理

分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光线透过测试的样品后，部分光线被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。

单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度（光路长度）成正比，其关系如下式：

A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc

式中 :A 为吸光度；

I0为入射的单色光强度；

I 为透射的单色光强度；

T 为物质的透射率；

k 为摩尔吸收系数；

L 为被分析物质的光程，即比色皿的边长；

c 为物质的浓度；

物质对光的选择性吸收波长，以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后可用同样条件将该供试品配成溶液，测定其吸收度,即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区，除某些物质对光有吸收外，很多物质本身并没有吸收但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定,故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅的因素较多，且常使用单色光纯度较差的仪器，故测定时应用标准品或对照品同时操作。

分光光度计仪器校准流程

1.检查分光光度计的按钮以及开关，使其归零。

2.按要求接通电源后，按“T键”，打开暗箱盖和电源开关，指示灯亮后预热20分钟。

3.预热后，取比色皿分别盛B液、S液、U液，放入检测室(比色皿用蒸馏水清洗后，再用比色液润湿，才可注满比色液)。液体排列光路。握住比色皿时，小心不要触摸光滑表面。用手指捏住羊毛面就行了。尽量不要把液体溅到光滑的表面上。如果有溢出物，用镜纸擦干。

4.调整面板的“零位微调”，使指示为00.0，即透光率“T”的零点，同时“1号”闪烁。

5.按“A”键，指示为“. 000”，“一”闪烁。如果指示读数不是比值，电子秤应调整“消光调零”电位器，使其符合要求。

6.拉出或推入拉杆，使U液和S液分别置于光路中读取A值，然后移动拉杆读取B管的A值。如果为0，则上述A值有效。

7.打开检测室的盖子，取出比色皿，检查仪器，将比色液倒入水箱，用自来水冲洗干净，倒扣在表镜中(盖上滤纸)。

8.操作完成后，关闭电源开关，拔出电源插头，取出比色杯架。如果检测室内有液体溅出，必须先擦拭干净，然后存放。分光光度计仪器必须存放在干燥通风的地方，以备下次使用。

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