荧光显微镜校准
一、准备工作
1. 准备荧光样品和显微镜荧光滤光片。
2. 打开荧光显微镜并调整照明强度,使荧光样品有一个清晰的图像。
二、校准显微镜荧光滤光片
1. 影响仪器校准的主要因素是荧光滤光片的光谱波长和荧光染料的波长。因此,在校准荧光显微镜之前,需要检查荧光滤光片是否正确。
2. 将某种荧光滤光片安装在显微镜上。打开照明并调整强度,使荧光样品呈现出清晰的图像。
3. 将显微镜沿x轴和y轴移动,观察荧光样品在不同位置的荧光亮度变化。如果荧光亮度变化,说明荧光滤光片需要调整。
4. 调整荧光滤光片的方向,从而使荧光样品在所有位置的荧光亮度变化最小。
三、校准荧光染料
1. 确定荧光样品中最强的荧光染料。选择多个位置,观察荧光样品中该荧光染料的荧光亮度变化。
2. 改变荧光滤光片以检查荧光样品中该荧光染料的最适光谱波长。如果荧光亮度达到最大值,则说明该荧光滤光片是最适合的。
3. 重复步骤1和步骤2,以校准荧光样品中所有荧光染料的最适光谱波长。
4. 将校准后的荧光显微镜保存,以备下次使用。
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